ayx网站:COL1A1高效检测攻略让条带“卷”起来

  在检测纤维化相关安排（如liver fibrosis、skin fibrosis安排）中COL1A1的WB试验中，运用一般RIPA裂解液提取样本，离心后取上清进行电泳，常呈现信号极弱或无条带的状况。

  这是由于老练COL1A1作为胞外基质（ECM）蛋白，在安排中经过交联构成纤维结构，不溶于一般RIPA等温文去污剂。离心后上清中仅含少数可溶性前体，方针蛋白首要存在于沉积（Pellet）中，直接取上清导致样本丢掉。

  （1）选用强变性提取法。引荐运用含1%-2% SDS的裂解液，或直接参加2×上样缓冲液（含SDS和DTT/β-巯基乙醇）进行安排匀浆；

  （2）有必要合作超声破碎（堵截基因组DNA下降粘度）和煮沸处理，细密安排（如肌腱、骨）可辅佐4M-8M尿素。细胞样品若检测总COL1A1，需搜集细胞培养上清，浓缩后与裂解液混合上样。

  我用的是abmartMC33401抗体，它能针对COL1A1规划，可有用辨认强变性条件下提取的方针蛋白，进步检测灵敏度。